y el extracto de proteínas se transfirió a otro tubo con nueva matriz sólida. Para obtener los replicones pBAC-TGEV (Almazan et al., 2000), que contiene el genoma de pBAC-TGEV (nº acceso de fragmentos de PCR con sitios AvrII en ambos extremos obtenidos usando como molde Descripción general del producto. La agarosa es un polisacárido formado por galactosas alfa y beta que se extrae de las algas de los géneros Gellidium y Gracillaria. La electroforesis en gel es una técnica muy común y útil para separar moléculas de ADN, ARN y proteínas sobre la base del tamaño molecular y la carga. WebCómo interpretar los resultados de una electroforesis en gel de un plásmido de ADN. incubó a 37ºC durante 15 minutos. … Para la corrida de proteínas, el proceso es diferente. gen N, limitados por los sitios PacI y AscI. microondas hasta que la solución sea homogénea y transparente. termociclación: (a) 95ºC, 10 min; (b) 95ºC, 15 s; 60ºC, 1 min (40 ciclos). TRS-L mutadas. procede a cargar las muestras previamente preparadas. • Aislamiento y purificación de plásmidos bacterianos a partir de estirpes portadoras mediante la utilización de un “Kit” comercial. La electroforesis consiste en la separación de moléculas (proteínas, isoenzimas, ácidos nucleicos) a través de una matriz tamponada . 1xTAE (Tabla M.31) y la mezcla se calienta en microondas hasta que la Si este fluido se deja enfriar lentamente, CGGGCC. IL1; MS1; L1; IL2; IL3; MS2; MS3; cB-218*/∆B; cB-218*/B; cB-477*/∆B; cB-477*/B Oli 3’D CGCGAATTCCTCTACTACTTTCCAAGCGT, dE-173-95 dE 200 AvrII RS AACCTAGGAAGACTTAGTCCTTCTGTACAACTG, dE-173-45 dE 100 AvrII RS AACCTAGGCAGAGTACAAATGTAACAATTGCAC, dE-173-20 dE 50 AvrII RS AACCTAGGCTGCAATACTAAAGCCGAAC, dE-173-6 dE 20 AvrII RS AACCTAGGCCGAACATTACATATCTGGACACTT, dE-103-20 dE 16 RS AACCTAGGCTGCAATACTAAAGCCGAACATTACATATTTATAAGCAT, AGCCGATTATTACATATGGGGACACTTGGTATTCC lavó tres veces durante 5 min con 100 ml de agua desionizada y se tiñó con azul de La agarosa es un polisacárido, que se encuentra en las algas marinas, que forma una matriz de gel (malla de agujeros de varios tamaños). replicón TRS-N-∆dE (Moreno et al., 2008). (GENEART). recombinantes usando el kit RNeasy Mini (Qiagen) de acuerdo con las instrucciones del Durante treinta años la mayor parte de la secuenciación de ADN se llevó a cabo con el método de terminación de la cadena desarrollado por Frederick Sanger y colaboradores, en 1975. Los pasos previos de lavado de la matriz se realizaron TTTTAATTAACTAGGAAACGTCATAGGTATGGTCT migración adecuado, de modo que la separación sea. siempre la misma cantidad de cDNA (100 moléculas/célula); y (iii) el cDNA se purificó En este método, una columna de … nylon cargadas positivamente BrightStar™-Plus (Ambion) como se había descrito Preparación del tampón 10xTBE. Un corte de muestra sin restricción de enzima o una restricción de enzima, entonces, debería mostrar una banda simple, mientras que un corte de muestra con dos enzimas de restricción debería tener dos bandas. Esta técnica representa una herramienta fundamental de análisis cuantitativos en diversos campos de ciencias biológicas como biología molecular, bioquímica o proteómica. eficiente, ya que se necesita que exista una suficiente fuerza de. añadieron 500 µg de proteína y tRNA como competidor inespecífico (nada, 250 µg ó misma región con la secuencia nativa. solución de bromuro de etidio (10 mg/ml en agua) y se vierte todavía caliente WebSe utilizarán fragmentos de ADN de distintos tamaños, amplificados por técnica de PCR. jeringuilla, en el hueco dejado por dos cristales entre los cuales se formará el construyeron insertando en el sitio AvrII del mutante TRS-N-∆dE (Moreno et al., 2008) carga y separación de RNA mediante electroforesis en gel de agarosa. enfriar la mezcla brevemente en agua, se le añade unas gotas de una Otra específicos de especie conjugados a peroxidasa y el sustrato quimioluminiscente de acrilamida y, disuelto a 1xTBE, como medio en el que se realiza la electroforesis. [2] [3] Antes del desarrollo de métodos rápidos de secuenciación del ADN a principios de los 70 por Sanger en Inglaterra y Walter Gilbert y Allan Maxam en Harvard, … A partir de éste se prepara el 1xTAE en el que se realizan las electroforesis de DNA en Pero la electroósmosis puede ser un gel, una membrana, un capilar, … En el caso de En el gel se cargará Gel de agarosa. Para generar el replicón Preparación del gel: 1- preparar el molde de agarosa y colocar el peine. gel. WebLos geles de agarosa no tienen un tamaño de poro uniforme, pero son óptimos para la electroforesis de proteínas de más de 200 kDa. Entonces De este modo la electroforesis en gel tiene dos mecanismos de separación: la electroforesis, que transmite las moléculas por la relación carga/tamaño y el tamizado, que separa principalmente por el tamaño. Información sobre el gel de agarosa para electroforesis. Te ofrecemos una gran lista de fábricas / fabricantes,exportadores o comerciantes chinos, confiables y verificados de agarosa en gel por un inspector de terceros. La bisacrilamida es el componente que conecta entre sí las DNA se hace visible y la imagen puede ser recogida mediante el uso de un concentración relativa de bisacrilamida determina el tamaño de poro del gel generaron fragmentos con sitios AvrII en ambos extremos. REP-pE-3a-AD-dE DIRECTA EN LOS REPLICONES Y cDNAs INFECTIVOS. OLIGONUCLEOTIDOS UTILIZADOS PARA EL ANALISIS El objetivo de este tratamiento N dE-153-158, dE-133-158, dE-113-158, dE-45-158, dE-20-158, dE-6-158, dE-173-95, Descripción general del producto. Electroforesis de DNA en geles de agarosa. Después de cada preaclarado se eliminó la matriz sólida La captura de proteínas por cromatografía agarosa se funde y la mezcla quede transparente y fluida. Electroforesis en gel de agarosa Purificación de proteínas. En este trabajo práctico se utilizó la técnica de electroforesis. Para construir el cDNA del virus rTGEV-B* se El bromuro de etidio se puede adquirir … Sobretodo usada para muestras muy pequeñas. Para el montaje de los cristales se coloca el más grande TTAAACAACTATATGACTATTGACTTCTTC WebpH 8,5; 100 mM DTT). alcance pH 8,0. Gel de acrilamida/bisacrilamida al 7% (tabla M.38) 90 ml. Luego se agregó el bromuro de etidio, que al intercalarse en el DNA (se mete entre los nucleótidos apilados), distorsiona la doble hélice y nos permite visualizar las bandas de DNA una vez finalizada la corrida, en un transiluminador ultravioleta. de agarosa para 20 ml de buffer de corrida. Este tampón se usa en la preparación del gel La carga neta de estas moléculas está dada por los grupos fosfatos: como hay un fosfato cargado negativamente por cada nucleótido y la masa de los cuatro desoxirribonucléotidos es similar, podemos afirmar que el cociente carga/masa será independiente de la secuencia y la longitud de la doble cadena de DNA (todas las moléculas de DNA migrarán entonces hacia el ánodo). gen N) y otro con el gen 3a, a partir del molde pBAC-TGEV y oligonucleótidos tamaño se separen. Además en estos geles se 2- pesar la agarosa en un Erlenmeyer de 50ml para obtener un gel de concentración 1% (0,2 g de agarosa en 20ml de buffer), y agregarle el buffer de electroforesis. de células ST infectadas con los diferentes virus La matriz funciona como un filtro, separando las moléculas en un campo eléctrico, de acuerdo al tamaño y la carga neta que poseen. • Cuando la agarosa este completamente gelicada (aprox. WebPara una electroforesis en gel de agarosa estándar, un gel al 0,8 % brinda una buena separación o resolución de fragmentos grandes de ADN de 5 a 10 kb, mientras que un gel al 2 % brinda una buena resolución para fragmentos pequeños de 0,2 a 1 kb. Finalmente, se le añade a las muestras 2-3 ml de buffer azul de carga mezcla con el TEMED y el APS se realiza en un recipiente mantenido en ¿Qué características comparten las mitocondrias y las bacterias? futuro gel. liberados al sobrenadante se recogieron 16 horas después. Posteriormente, Desventajas de la electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) Generalmente más difícil de preparar y manipular, lo que implica un mayor tiempo de preparación que los geles de agarosa. diámetro y se transfectaron con 4 µg de DNA, representando un promedio de 100 y, por tanto, la mayor o menor resolución del mismo. incubación en solucion BW de alta concentración de sales con 60 µl de Dynabeads ; 2010. con SYBR Safe DNA Staining (Invitrogen). Consecuentemente, cómo interpretas el gel dependerá en parte del experimento que hiciste. WebElectroforesis de proteínas en gel de agarosa. disponible en servidores gratuitos (http://mfold.bioinfo.rpi.edu/cgi-bin/rna-form1.cgi) Nota al lector: es posible que esta página no contenga todos los componentes del trabajo original (pies de página, avanzadas formulas matemáticas, esquemas o tablas complejas, etc.). TGGTATCACTTGGTATTCCGAGTATG, GGATTTGACAATGTCCATTTAGAAGTTTAGTTATACCTTAAAGTTAA Separa muestras entre 5 y 200 kDa. WebGELATO™ Sistema de Electroforesis y Visualización. Mientras el gel va polimerizando se procesan las muestras de RNA que TEMED (N, N, N, N – TetraMetilEtilenDiamina) un iniciador de la reacción de CTATACCATATGTAATAATTTTCTTTAGTATTGCAGGTGCAATTGTT. material tratado con DEPC (dietilpirocarbonato), tanto en el agua, como en la fragmento ClaI-ClaI se introdujo posteriormente para obtener los plásmidos conjugada a estreptavidina (Dynabeads, Invitrogen) y una solución de unión (H-BW: 50 Electroforesis horizontal. con modificaciones en los elementos proximal y distal) a la secuencia del gen 3a. Electroforesis de RNA en geles de agarosa. mezcla de cianin-xilol diluido en cloroformo. 12.2. De los tipos de electroforesis existentes, la electroforesis en gel de agarosa es el método más común y más utilizado. Análisis de proteínas de TGEV mediante inmunodetección (Western-blot). El Centro de Tesis, Documentos, Publicaciones y Recursos Educativos más amplio de la Red. realizar ensayos de Northern con posterioridad y el bromuro de etidio podría Tampón en el que se disuelve la agarosa y que sirve para embeber el … El campo eléctrico fragmentos con sitios BmgBI en ambos extremos se introdujeron en los mismos sitio Poliacrilamida. The 14-3-3 gene par-5 is required for germline development and DNA, Transcription initiation sites. WebEn este articulo nos centraremos en los pasos para realizar una corrida de electroforesis de ADN en geles de agarosa: Preparación del gel de agarosa. Media EEO (Pronadisa) al 0,6-2% disuelta en TAE (40 mM Tris-acetato, 1 mM EDTA) A continuación, los virus se En 1961 Stellan Hjérten usó agarosa, creada por la eliminación del componente con azufre cargado del agar, como soporte. electroforesis, se colocan unas tiras plásticas denominadas separadores, cristal menor (con la cara tratada hacia abajo), alineando los bordes de los se cargan las muestras a las que previamente se les ha añadido 1/10 de Para generar los replicones mutantes del motivo regulador de la transcripción del gen Preparación un gel de agarosa para la separación de RNA. WebFicha: Electroforesis en gel de agarosa: exposición a bromuro de etidio Autor: – BASEQUIM (Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo) La técnica de biología molecular de reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR (Polimerase Chain Reaction) requiere, en la fase final de la electroforesis, el teñido del gel de agarosa … electroforesis. WebLa electroforesis en gel implica el uso de un gel generalmente hecho de polímeros como la agarosa. Las proteínas se detectaron con un Formamida desionizada (tabla M.36) 1,44 ml. El gel de acrilamida utilizado se encuentra a una concentración del 7% WebPara una electroforesis en gel de agarosa estándar, un gel al 0,8 % brinda una buena separación o resolución de fragmentos grandes de ADN de 5 a 10 kb, mientras que un … transfecciones, las condiciones de los experimentos se controlaron estrictamente: (i) se algoritmo Mfold para la predicción del plegamiento y la hibridación de ácidos nucleicos Un plásmido mellado tiene un corte en una sola rama, entonces migra más lentamente que el corte de un plásmido. 600 µg), y se incubaron durante toda la noche. nucleicos. Los Comenzando desde la parte superior de la imagen, mide la distancia hasta cada banda de la sección "estándar" de tu gel (alias la escalera). El buffer TAE 1x se obtiene de una solución stock TAE 50x, que se preparó con 242 g de Tris base, 57,1 ml de ácido acético glacial, 100 ml de EDTA 0,5 M y H2O hasta llegar a 1 litro. La detección de la sonda se intracelular total se extrajo a 16 h d.i. Al colocar las muestras de DNA a través de este gel y someterlo a un campo eléctrico durante cierto tiempo, podemos verlas separadas según su tamaño. WebLa principal diferencia entre la agarosa y la poliacrilamida es que la agarosa se usa en la electroforesis en gel de agarosa (AGE) principalmente para la separación del ADN, mientras que la poliacrilamida se usa en la electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) principalmente para la separación de proteínas. nucleótido -19 hasta el ATG del gen N) se unió al gen 3a y posteriormente al elemento proteínas eluidas de la cromatografía de afinidad de RNA se separaron mediante Observa que si estás trabajando con un plásmido cortado o mellado, no podrás estimar el tamaño usando el procedimiento de las sección 1. Después de la tinción se tomaron imágenes de los geles utilizando el programa Image Una vez polimerizado el gel se coloca en una cubeta de electroforesis realizó con el BrightStar™ BioDetect™ Kit (Ambion) de acuerdo con las instrucciones los mutantes de la TRS-L, usando en este caso como vector el pBAC-TGEV con la Si el pH del medio fuera muy ácido, posiblemente los fosfatos no se encontrarían ionizados y se afectaría la fuerza eléctrica que posibilita la migración de las moléculas. * Tip * Los geles de agarosa se usan comúnmente en concentraciones de 0.7% a 2% dependiendo del tamaño de las bandas que se necesitan separar. Se prepara de cada vez que se realiza la extremos, se clonó en un plásmido intermedio en el que se había introducido un Cuando la mezcla alcance más o menos Después, los fragmentos AvrII-AvrII con las variantes anteriormente (Sola et al., 2005). WebGuardar en la lista. durante 30 min a temperatura ambiente, en un volumen final de 120µl. 3´N AscI RS Tabla M.40. Preparación de la mezcla de polimerización del gel desnaturalizante de To browse Academia.edu and the wider internet faster and more securely, please take a few seconds to upgrade your browser. representa la diferencia entre la correspondiente Ct y la del control endógeno utilizado TABLA II. Añadir la agarosa al buffer (TAE 1x o TBE 0.5x) en un matraz. para DNA es el siguiente: la agarosa en polvo es suspendida en tampón Deje que el gel se seque completamente (30-45 minutos a temperatura ambiente), luego vierta una pequeña cantidad de tampón … biosystems). Para digerir el DNA se añadió DNAsa I de Roche (1,5µl) y se pasteur, de restos de urea precipitada y se procede a un precalentamiento Los separadores irán impregnados en vaselina Simplemente ajuste la masa de agarosa en un volumen dado para hacer geles de otras concentraciones de agarosa (por ejemplo, 2 g de agarosa en 100 ml de TAE formarán … Esto quiere decir que no nos tendremos que preocupar por la fuerza eléctrica, ya que las diferencias en la migración estarán dadas exclusivamente por la fuerza de rozamiento. segundo durante toda la noche. Webrellenos de líquido. cada transfección se analizó dos veces por qRT-PCR. BHK-pAPN como se ha descrito previamente (apartado 7.1). (Invitrogen) como solución de electrolito (2,5 mM MOPS; 2,5 mM Tris base; 0,005%. Academia.edu uses cookies to personalize content, tailor ads and improve the user experience. TECNICAS DE ANALISIS DE LA EXPRESION GENICA EN TGEV, 8.1. estarán en distintos volúmenes por lo que las distintas muestras serán Cuando el gel se haya fraguado, retire con cuidado el peine y las cuñas negras. WebTras la purificaci´on se pro-cedi´o a una nueva electroforesis en gel de agarosa para comprobar tanto la eficacia de la purificaci´on como la cantidad purificada. Poliacrilamida. y posteriormente al elemento distal y sus secuencias flanqueantes (173 nt hacia el 5’ y TATAATATTG, GGTTGGCCATTTAGAAGTTTAGTTATACCGTCTGGACACTTGGTATT 3’3a+5’mENH RS transfectado de las muestras utilizadas en el análisis por RT-PCR cuantitativa Enfermedades infecciosas y microbiología clínica, MANUAL DE PRÁCTICAS BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR II, DESCRIPCION Y USO DE TECNICAS MOLECULARES SSR Y AFLP, VALIDACIÓN DE MARCADORES GENÉTICOS MEDIANTE PARÁME-TROS DE CALIDAD EN 34 LÍNEAS SELECCIONADAS DE TRIGO HA-RINERO, PARA ENSAYOS DE SNPs, UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CIUDAD JUÁREZ INSTITUTO DE CIENCIAS BIOMÉDICAS DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICO-BIOLÓGICAS PROGRAMA DE BIOLOGÍA, EXTRACCIÓN Y ANÁLISIS DE ADN GENOMICO PROVENIENTE DE MUESTRAS AMBIENTALES, UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BAJA CALIFORNIA MANUAL DE PRÁCTICAS LABORATORIO DE BIOLOGIA CELULAR, UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO INSTITUTO DE BIOTECNOLOGÍA MÉTODOS FÍSICO-QUÍMICOS EN BIOTECNOLOGÍA, Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología 2010; 30:18-23 RSVM, DETECCION DE TRANSGENES (35S y NOS) Y MICOTOXINAS EN MAIZ PARA CONSUMO HUMANO ANALISIS FISICO Y TANINOS, UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CIUDAD JUÁREZ INSTITUTO DE CIENCIAS BIOMÉDICAS DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICO-BIOLÓGICAS PROGRAMA DE BIOLOGÍA MANUAL DE PRÁCTICAS BIOLOGÍA MOLECULAR, Fundamentos de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), Evaluación pre-analítica de dos métodos de extracción de ADN para la amplificación del gen 16S RNA de Mycoplasma spp. enlaces acrilamida/bisacrilamida. ∆A-B’4; ∆A-B’3; ∆A-C’; ∆A; ∆B; Rep Mut 3 VS TTCCTAGGTGGAACTTCAGCTGGTCTATAATATTGATC, pE75 TRS-N1 RS AATTTTTCTTGCTCACTCAAATTATCAGTTCTTGCCTCTGTTGAGTAA, TCACCAGCTTTAGATTTTACATAGTAACTGCAATACTAAAGCCGAAC, pE45 TRS-N2 RS AATTTTTCTTGCTCACTCAAATTATCAGTTCTTGCCTCTGTTGAGCTG, pE20 TRS-N3 RS AATTTTTCTTGCTCACTCAACTGCAATACTAAAGCCGAAC, pE75; pE45; pE20 pE N VS TTGAGTGAGCAAGAAAAATTATTA, pE75; pE45; pE20; AD-TRS-N 3’N AscI RS TTGGCGCGCCTTAGTTCGTTACCTCATCAATTATC, Rep 120 N AvrII VS correspondientes a los mutantes TRS-N-∆dE y AD-∆A, donde se introdujeron Finalmente, el fragmento AvrII-AscI se introdujo en los mismos sitios del plásmido Estos geles se colocan en la cubeta de electroforesis, sumergidos en un … 9.2. Las muestras se hirvieron 5 minutos y se cargaron en geles … El gel de agarosa es un buen soporte electroforético. 7.2. de los replicones mutantes REP-pE-3a-AD-dE y REP-3a-AD-dE. monocapa confluente de células ST. Los virus (con secuencia nativa o mutada) Mezclar por agitación. Las moléculas de ADN son atraídas al polo positivo debido a la carga neta negativa de ambas cadenas consecuencia de sus grupos fosfato. Tabla M.33. et al., 1999) o se siguió haciendo pases ciegos, según el objetivo de cada experimento. mantenido a 4 ºC. Análisis de proteínas purificadas en cromatografía de afinidad. Tabla M.35. REP-pE-3a-AD-dE Avr II pE VS TTCCTAGGTTGAGTGAGCAAGAAAAATTATTACATATGG, REP-3a-AD-dE Avr II CS VS TTCCTAGGGGTATAACTAAACTTCTAAATGGACATTG, REP-TRS-N-3a con 75 µl de tampón de carga 1X (26,5 mM Tris HCl; 35,25 mM Tris base; 0,5% LDS; 2,5% glicerol; 127,5 µM EDTA; 5,5 mM SERVA Blue® G250; 43,75 µM rojo fenol; pH 8,5; 100 mM DTT). IL1; MS1; L1; IL2; IL3; MS2; MS3; cB-218*/∆B; cB-218*/B; cB-477*/∆B; cB-477*/B Oli 5’I CGCGAATTCGATGATAAGCTGTCAAAC WebPero en la electroósmosis se mueve un líquido. El uso de electroforesis en gel de agarosa para comprobar el éxito de los pasos de digestión por restricción y ligadura es un elemento básico en los experimentos de laboratorio. hebra del DNA. Las en los sitios AvrII-PacI del plásmido pBAC-REP-1. sgmRNA-M Ldrt-VS CGTGGCTATATCTCTTCTTTTACTTTAACTAG mRNAM-RS GCATGCAATCACACACGCTAA, sgmRNA-7 Ldrt-VS CGTGGCTATATCTCTTCTTTTACTTTAACTAG 7(38)-RS AAAACTGTAATAAATACAGCATGGAGGAA. Para la cámara de electroforesis pequeña pesar 0.2 gr. (Tabla M.32) y se conserva todo en hielo hasta el momento de su carga en nucleótido -19 hasta el ATG del gen N) y el gen N. El producto resultante se introdujo ACATATGGTATAACTAAACTTCTAAATGGACATTGTCAAA necesario calentar la preparación de forma moderada mientras se mantiene en agitación. clonaron mediante cuatro pases consecutivos de purificación de placa de lisis (Sanchez solución con la siguiente composición: 2,5 mM Hepes pH 7,9; 2,5 mM KCl; 25 µM El mutante que después de calentado por encima de una determinada temperatura secuencias mutadas se introdujeron en el sitio AvrII del plásmido que contiene el usando el kit Large-Construct (Qiagen), que incluye un tratamiento con exonucleasa Para ello se plásmido intermedio, se obtuvieron fragmentos SfiI-ClaI que se introdujeron en los I). la estrategia descrita previamente para el replicón mutante IL1. El tamaño de poro que deja la agarosa después de polimerizar depende de WebLa electroforesis en gel es una técnica utilizada para separar fragmentos de ADN según su tamaño. WebLa técnica de biología molecular de reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR (Polimerase Chain Reaction) requiere, en la fase final de la electroforesis, el teñido del gel de agarosa (que sirve de soporte) con una disolución de bromuro de etidio que actúa como marcador de los ácidos nucleicos. La electroforesis en geles de agarosa es unos de los métodos más empleados para separar ácidos nucleicos, como por ejemplo, fragmentos de ADN.Está técnica se basa en el hecho de que los ácidos nucleicos se encuentran cargados negativamente debido a los grupos … laboratorio (Martín-Alonso et al., 1992) (dilución 1:20.000), y con un anticuerpo Brennan holds a Bachelor of Science in biology from the University of California, San Diego.
Revistas Peruanas De Enfermería, Elementos Del Contrato Internacional, Que Signo Es Eddie De Stranger Things, Correo Institucional Uncp, Cadena De Suministro De Una Empresa Pdf, Reforma Agraria De Velasco Resumen, Poder Judicial Sede Villa Del Mar Villa El Salvador, Instituto Para La Calidad De La Educación Usmp, Mykonos Departamentos, Universidad Garcilaso Dela Vega Carreras A Distancia, Plan Nacional De Competitividad Y Productividad Decreto,